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              土壤堿性磷酸酶 (S-AKP/ALP) 活性檢測試劑盒說明書

              提 供 商: 上海研謹生物科技有限公司 資料大?。?/td>
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              土壤堿性磷酸酶 (S-AKP/ALP) 活性檢測試劑盒說明

              意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

              格:100T/96S

              產品內容:

              試劑一:液體 42mL×1 瓶,4℃避光保存。

              試劑:粉劑×1 瓶,4℃保存。用前加 100mL 蒸餾水充分溶解。

              三:液體 2.5mL×1 瓶,4℃保存。

              試劑四:粉劑×1 支,4℃避光保存。臨用前加 576µL 無水乙醇 (自備) ,24µL 蒸餾水充分溶解。 (變褐色后不能再使用)

              準品:液體 1mL×1 支,0.5 µmol/mL 苯酚標準液,4℃保存。

              產品說明:

              壤磷酸酶是一類催化土壤有機磷礦化的酶,其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉 化及其生物有效性,是評價土壤磷素生物轉化方向與強度的指標。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有 磷含量和 pH 顯著影響,根據最適 pH 范圍,通常分為酸性、中性和堿性三種類型。

              性環境中,S-AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉,通過測定酚的生成量即 計算出 S-AKP/ALP 活性。

              驗中所需的儀器和試劑:

              分光光度計/酶標儀、微量比色皿/96 孔板、臺式離心機、37℃恒溫培養箱、分析天平、可調式 器、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。

              作步驟:

              一、粗酶液提?。?/span>

              稱取風干混勻土壤約 0. 1g ,加入 0.05mL 甲苯 (自備) ,輕搖 15min ;加 0.4 mL 試劑一并且搖 勻后,置于 37℃恒溫培養箱,開始計時,催化反應 24h;到時后迅速加入 1mL 試劑二充分混勻,以 酶催化的反應。10000rpm 室溫離心 10min ,取上清液置于冰上待測。

              、測定步驟:

              (1)  分光度計/酶標儀預熱 30 min 以上,調節波長到 660 nm ,蒸餾水調零。

              (2)  空白管:取微量比色皿/酶標板,加入 10 µL 試劑一,20 µL 試劑三,4 µL 試劑四,充分混  勻,顯色后再加蒸餾水 166µL ,混勻后室溫靜置 30 min ,于 660 nm 測定吸光度,記為 空白管。

              (3)  標準管:取微量比色皿/酶標板,加入 10 µL 標準液,20 µL 試劑三,4 µL 試劑四,充分混  勻,顯色后再加蒸餾水 166µL ,混勻后室溫靜置 30 min ,于 660 nm 測定吸光度,記為 標準管。

              (4)  測定管:取微量比色皿/酶標板,加入 10 µL 上清液,20 µL 試劑三,4 µL 試劑四,充分混  勻,顯色后再加蒸餾水 166µL ,混勻后室溫靜置 30 min ,于 660 nm 測定吸光度,記為 測定管。 注意:空白管和標準管只需要測定一次。


              S-AKP/ALP 活性計算:

              活性單位定義:37℃中每克土壤每天釋放 1nmol 酚為 個酶活單位。

              S-AKP/ALP  nmol/d/g =[C 標準液 ×(A 測定管- A 空白管)÷(A 標準管- A 空白管)]×V 

              ÷W÷T×1000

              =725×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管W

              C 準液:0.5 µmol/mL;  V 總:催化體系總體積,1.45mL;W:土壤樣品質量,g;T :催化 應時間,24 h=1 d;1000:單位換算系數,mol=1000nmol。

              :線性范圍為 0.03125µmol/mL-2.5µmol/mL

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